Retrato de Joana da Áustria, mãe de Maria de Médici

Joana da Áustria morreu em Florença em 1578, antes de a filha Maria completar três anos. Era filha do imperador Fernando I e sobrinha de Carlos V, e em 1565 se casara com Francisco de Médici, levando sangue imperial para a família. Rubens a pintou mais de 40 anos depois, sem nunca a ter visto, apoiando-se num tipo florentino como o retrato póstumo feito por Giovanni Bizzelli em 1586, muitas vezes copiado. Na galeria da rainha, ela ficava à esquerda da parede de entrada, voltada para o retrato do marido, que lhe respondia do outro lado. O pintor a vestiu com um traje pesado de bordados de ouro, um véu claro e um chapéu preto de plumas. O pequeno esboço a óleo dessa figura está hoje em Copenhague.